Plasmide CRISPR d'Activation (h) DMRT1: sc-402856-ACT

DMRT1 (facteur de transcription 1 apparenté à doublesex et mab-3) code un facteur de transcription à doigt de zinc se liant à l’ADN, qui joue un rôle central dans le développement des gonades humaines et le maintien du destin des cellules germinales mâles. DMRT1 régule des programmes transcriptionnels qui contrôlent la détermination sexuelle, la différenciation des cellules de Sertoli ainsi que la prolifération et la différenciation des spermatogonies, en s’intégrant à des réseaux plus larges incluant des voies dépendantes de SOX9 et sensibles à l’acide rétinoïque. Des altérations du dosage ou de la régulation de DMRT1 ont été associées à des troubles du développement sexuel, à une spermatogenèse altérée et à une dysgénésie gonadique, ce qui en fait une cible précieuse pour des études mécanistiques en biologie de la reproduction. En outre, une activité dérégulée de DMRT1 a été rapportée dans certains contextes tumoraux, ce qui soutient son utilisation pour étudier la spécification de lignée et le contrôle transcriptionnel dans des modèles pertinents pour les maladies.

DMRT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DMRT1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DMRT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DMRT1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DMRT1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DMRT1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DMRT1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DMRT1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DMRT1 dans les cellules tumorales présentant une expression de DMRT1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.