Plasmide CRISPR d'Activation (h) Dlx-2: sc-402961-ACT

DLX2 code le facteur de transcription à homéoboîte Dlx-2, un régulateur nucléaire qui coordonne des programmes d’expression génique au cours du développement embryonnaire, en particulier dans la mise en place du prosencéphale, la différenciation des interneurones et la morphogenèse cranio-faciale. Dlx-2 agit au sein de réseaux transcriptionnels qui s’entrecroisent avec des voies de signalisation et de spécification de lignée contrôlant le destin, la migration et la maturation des progéniteurs neuronaux. Une expression altérée de DLX2 a été rapportée dans des contextes de dérégulation neurodéveloppementale ainsi que dans de nombreux types de tumeurs, où elle peut refléter des modifications de l’état de différenciation et du comportement invasif. Ces propriétés font de DLX2 un nœud utile pour étudier les circuits de régulation génique du développement et la reprogrammation transcriptionnelle associée aux maladies dans des cellules humaines.

Dlx-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DLX2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Dlx-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DLX2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DLX2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Dlx-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DLX2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Dlx-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Dlx-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de DLX2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.