Plásmido Doble Nickase (h) DIO1: sc-405162-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)DIO1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa DIO1 (h) y el plásmido de doble nickasa DIO1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a DIO1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: DIO1 Anticuerpo (B-7): sc-515198
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) DIO1 | sc-405162-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) DIO1 | sc-405162-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DIO1 codifica la desyodasa de yodotironinas tipo I, una selenoenzima que cataliza la desyodación del anillo externo e interno de las hormonas tiroideas, convirtiendo la tiroxina (T4) en la triyodotironina (T3) bioactiva y regulando la disponibilidad local de hormonas tiroideas. Esta actividad contribuye a la homeostasis endocrina y modula los programas transcripcionales controlados por los receptores de hormonas tiroideas, vinculando la función de DIO1 con la tasa metabólica, el metabolismo de lípidos y carbohidratos y procesos celulares sensibles al estado redox. La expresión de DIO1 es destacada en hígado y riñón y está modulada por el estado nutricional y señales hormonales que influyen en la dinámica de la señalización tiroidea. La actividad desyodasa desregulada se asocia con perfiles alterados de hormonas tiroideas observados en trastornos tiroideos y perturbaciones metabólicas sistémicas, lo que convierte a DIO1 en un objetivo relevante para estudios mecanísticos de vías dependientes de hormonas.
DIO1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DIO1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DIO1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DIO1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DIO1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.