DHRS3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-411259

概要

DHRS3（dehydrogenase/reductase 3）は、NADPH依存性の短鎖デヒドロゲナーゼ／レダクターゼをコードしており、レチナール（レチナールデヒド）をレチノールへ還元する反応を触媒して、細胞内レチノイドの恒常性維持に寄与します。DHRS3は、レチナールがレチノイン酸へ酸化される際の基質供給を制限することで、分化、胚発生、上皮の生物学、代謝適応に影響するレチノイン酸シグナル伝達プログラムを調節します。DHRS3の発現はレチノイドに応答し、反応性アルデヒドのフラックス制御を介して、レチノール貯蔵や酸化ストレス関連プロセスとも統合的に関与します。レチノイド代謝の破綻やDHRS3活性の変化は、発生異常や、がんに関連した分化状態の変化と関連づけられており、レチノイド駆動性表現型の機序研究において重要な標的となります。

DHRS3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDHRS3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DHRS3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DHRS3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DHRS3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DHRS3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DHRS3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DHRS3の機能に不可欠なDHRS3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DHRS3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DHRS3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDHRS3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DHRS3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DHRS3 HDRプラスミド（h）および DHRS3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDHRS3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDHRS3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。