Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) DHFR: sc-416991-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)DHFRL1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa DHFRL1 (h) y el plásmido de doble nickasa DHFRL1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a DHFR2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) DHFR | sc-416991-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) DHFRL1 | sc-416991-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El DHFR2 humano codifica la dihidrofolato reductasa (DHFR), una enzima dependiente de NADPH que cataliza la reducción del dihidrofolato a tetrahidrofolato, manteniendo el metabolismo de un carbono necesario para la biosíntesis de novo de timidilato y purinas. A través de su papel en el ciclo del folato, DHFR sostiene la replicación y reparación del ADN, la progresión del ciclo celular y la capacidad de metilación celular mediante su conexión con el metabolismo de metionina/S-adenosilmetionina. La alteración de la actividad de DHFR influye en el equilibrio de los pools de nucleótidos y en la estabilidad del genoma, procesos que se examinan con frecuencia en contextos de estrés proliferativo y remodelación metabólica. Por ello, la biología de DHFR se utiliza ampliamente para estudiar vías biosintéticas dependientes del folato y las respuestas celulares al agotamiento de nucleótidos y al estrés replicativo.
DHFRL1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DHFR2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DHFR2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DHFR2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DHFR2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.