DGK-ι CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406306

概要

DGKIは、ジアシルグリセロールキナーゼ・イオタ（DGK-ι）をコードしています。DGK-ιはジアシルグリセロール（DAG）をリン酸化してホスファチジン酸を産生する酵素であり、脂質性セカンドメッセンジャーシグナル伝達の強度（振幅）と持続時間を調節します。DGK-ιはDAGの利用可能量を制限することで、プロテインキナーゼCやRasGRPなどのDAG応答性エフェクターの下流制御を担い、膜輸送、細胞骨格ダイナミクス、刺激依存的な転写プログラムを司る経路に影響を与えます。DGK-ιの活性は、多様な細胞種における増殖・分化・遊走を協調させる細胞シグナルネットワークの制御と関連しています。DAG／ホスファチジン酸のバランス異常やDGKファミリーのシグナル伝達は、がん生物学、免疫シグナル、神経系プロセスなどの文脈で研究が進められています。

DGK-ι CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDGKI遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DGKI内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DGKIのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DGK-ιタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DGK-ιシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DGKI欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DGK-ιの機能に不可欠なDGKIエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DGKIゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DGK-ι CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDGK-ι CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DGKI遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DGK-ι HDRプラスミド（h）および DGK-ι HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDGKIホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDGKI標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。