DGK-ι Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406306

Descripción general

DGKI codifica la diacilglicerol quinasa iota (DGK-ι), una enzima que fosforila el diacilglicerol (DAG) para generar ácido fosfatídico, modulando así la amplitud y la duración de la señalización lipídica de segundos mensajeros. Al limitar la disponibilidad de DAG, DGK-ι modula efectores aguas abajo sensibles al DAG, como la proteína quinasa C y RasGRP, influyendo en vías que regulan el tráfico de membrana, la dinámica del citoesqueleto y programas transcripcionales dependientes de estímulos. La actividad de DGK-ι se ha vinculado a la regulación de redes de señalización celular que coordinan la proliferación, la diferenciación y la migración en múltiples tipos celulares. El desequilibrio entre DAG y ácido fosfatídico, así como la señalización de la familia DGK, se han investigado en contextos que incluyen la biología del cáncer, la señalización inmunitaria y procesos neurológicos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DGK-ι (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DGKI en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DGKI junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DGKI tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DGK-ι.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DGKI para la investigación de la señalización de DGK-ι, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DGKI críticos para la función de DGK-ι
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DGKI para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DGK-ι CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido DGK-ι CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DGKI. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DGK-ι (h) y el plásmido HDR DGK-ι (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DGKI para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DGKI definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.