Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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DGAT1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401735-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DGAT1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DGAT1 Double-Nickase-Plasmid (h) und DGAT1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DGAT1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: DGAT1: sc-271934
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DGAT1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401735-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DGAT1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401735-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DGAT1 kodiert die Diacylglycerol-O-Acyltransferase 1, ein mit dem endoplasmatischen Retikulum assoziiertes Enzym, das den letzten Schritt der Triacylglycerol-Synthese aus Diacylglycerol und Acyl-CoA katalysiert. Durch die Steuerung der Bildung neutraler Lipide und der Biogenese von Lipidtröpfchen beeinflusst DGAT1 die zelluläre Energiespeicherung, lipotoxische Stressreaktionen und die Homöostase von Membranlipiden und ist dabei mit dem Fettsäurestoffwechsel sowie Glycerolipid-Stoffwechselwegen verknüpft. Die DGAT1-Aktivität ist relevant für Untersuchungen zur metabolischen Regulation in Adipozyten, Hepatozyten und im intestinalen Epithel, wo der Umgang mit Triacylglycerolen die Nährstoffaufnahme und Lipidsignale prägt. Veränderungen der DGAT1-Expression oder -Funktion wurden in Zusammenhängen wie Dyslipidämie, Insulinresistenz, hepatischer Steatose und lipidgetriebener Entzündung untersucht.
DGAT1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DGAT1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DGAT1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DGAT1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DGAT1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.