DET1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406735

概要

DET1（de-etiolated homolog 1）は、進化的に保存された核内制御因子をコードし、CUL4–DDB1型E3ユビキチンリガーゼ複合体の構成要素として足場（スキャフォールド）機能を担い、ユビキチン依存的なタンパク質分解・更新の調整に寄与します。この複合体を介してDET1は転写制御やクロマチン関連プロセスに関与し、細胞周期の進行、DNA損傷応答、プロテオスタシスに影響を及ぼします。DET1の機能は、ユビキチン化によって制御されるシグナル伝達プログラムとも交差しており、増殖やストレス適応に関わる遺伝子発現経路に影響するものを含みます。DET1に連なるユビキチンリガーゼ機能の破綻は、転写ネットワークの変化やゲノム安定性の異常と関連づけられており、がん生物学や、プロテオスタシスの不均衡を特徴とする他の疾患に関係する表現型と結び付けて論じられています。

DET1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDET1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DET1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DET1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DET1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DET1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DET1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DET1の機能に不可欠なDET1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DET1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DET1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDET1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DET1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DET1 HDRプラスミド（h）および DET1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDET1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDET1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。