Plásmido CRISPR de Activación (h) Desmuslin: sc-409241-ACT

SYNM codifica desmuslina (sinemina), una gran proteína asociada a los filamentos intermedios que se integra con la desmina y otras redes del citoesqueleto para estabilizar la arquitectura de células musculares y no musculares. La desmuslina favorece la alineación del sarcómero, la organización de las adhesiones focales y la mecanotransducción al vincular los filamentos intermedios con estructuras de membrana y contráctiles, influyendo así en la forma celular, la migración y las respuestas al estrés. En tejidos humanos, la expresión de SYNM está enriquecida en el músculo estriado y contribuye a la integridad del armazón miofibrilar y de los complejos de señalización del citoesqueleto. La desregulación de la función de sinemina/desmuslina y las alteraciones en la dinámica de los filamentos intermedios se han asociado con fenotipos miopáticos y con la remodelación del citoesqueleto observada en contextos de enfermedad del músculo cardíaco y esquelético, lo que convierte a SYNM en un nodo útil para estudiar vías de señalización estructural.

Desmuslin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SYNM sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Desmuslin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SYNM en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SYNM, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Desmuslin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SYNM y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Desmuslin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Desmuslin en células tumorales con expresión de SYNM silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.