desmoplakin I/II CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-430943

概要

マウスのDspは、デスモソームの主要な細胞骨格連結因子（サイトリンカー）であるデスモプラキンI/IIをコードしており、中間径フィラメントをデスモソームカドヘリン–プラコグロビン／プラコフィリン複合体へ係留することで、機械的ストレス下での組織の完全性を支えます。デスモプラキンは、細胞間接着、細胞骨格の組織化、ならびに上皮および心筋の構築を協調させる接着部位シグナル伝達ネットワークを調節します。デスモソーム機能の破綻はメカノトランスダクションやバリア特性を変化させ、表皮分化、創傷応答、心筋細胞のカップリングなどの過程に影響を及ぼします。Dspの機能不全は、皮膚脆弱性表現型や心筋症に関連する接着結合の欠陥など、デスモソーム関連の病態生物学を研究するモデルとして広く用いられています。

desmoplakin I/II CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるDsp遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Dsp内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Dspのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、desmoplakin I/IIタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、desmoplakin I/IIシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Dsp欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• desmoplakin I/IIの機能に不可欠なDspエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Dspゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• desmoplakin I/II CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびdesmoplakin I/II CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Dsp遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  desmoplakin I/II HDRプラスミド（m）および desmoplakin I/II HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDspホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDsp標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。