Dermatopontin Double Nickaseプラスミド (h): sc-402924-NIC

ヒトDPTは、結合組織に豊富に存在する細胞外マトリックスタンパク質であるデルマトポンチンをコードしており、コラーゲン線維形成、マトリックスの組み立て、細胞–マトリックス接着を調節します。デルマトポンチンは、細胞外マトリックスと細胞の間のシグナル伝達のクロストークに影響を与え、マトリックス成分や増殖因子経路との相互作用を通じて、創傷修復、線維芽細胞の活性、組織リモデリングなどの過程に関与します。DPT発現の変化は、線維化に関連するリモデリングや腫瘍微小環境の変化と関連付けられており、細胞外マトリックスの構造化や硬さが細胞挙動に影響し得ることが示されています。マトリックス調節因子として、DPTは、ストローマ生物学、血管新生、ならびに細胞外マトリックスのターンオーバーに結び付く炎症応答を制御する機構の研究でしばしば取り上げられます。

Dermatopontin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における DPT 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、DPT内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、DPTの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、DPTが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。