Deltex-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420429

概要

Dtx1は、Notchシグナル伝達を文脈依存的に調節するE3ユビキチンリガーゼであるDeltex-1をコードします。Deltex-1は、受容体近傍のシグナル伝達複合体や経路構成因子のターンオーバーに影響を与えることでNotchシグナルを制御します。ユビキチン依存的な制御を介して、Deltex-1は転写出力を形成し、マウスモデルにおける細胞運命決定、分化プログラム、免疫細胞の恒常性に影響を及ぼし得ます。Dtx1の活性は、プロテオスタシスやシグナル伝達を制御する経路と関連づけられており、特定の細胞環境ではNF-κB関連の炎症プログラムとのクロストークも示唆されています。Deltex-1が関与するNotch/ユビキチンシグナルの破綻は、免疫機能障害や腫瘍形成過程で研究されており、Dtx1は経路依存的な表現型を機構的に解析するうえで有用なノードとなります。

Deltex-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるDtx1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Dtx1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Dtx1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Deltex-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Deltex-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Dtx1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Deltex-1の機能に不可欠なDtx1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Dtx1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Deltex-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびDeltex-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Dtx1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Deltex-1 HDRプラスミド（m）および Deltex-1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDtx1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDtx1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。