Delta-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420011

概要

Dll3はDelta-3をコードしており、Delta-3は胚発生、とりわけ体節形成（somitogenesis）および前後軸パターニングにおいてNotch受容体シグナル伝達を調節する非典型的なNotchリガンドです。マウスでは、DLL3は主としてゴルジ体および小胞体内で機能し、受容体のプロセシングやリガンド間相互作用に影響を与えることでNotch経路の出力を調整し、細胞運命決定を司る転写プログラムを形成します。Dll3の機能が攪乱されると、振動性のNotchシグナルとセグメンテーション・クロックの動態が破綻し、椎骨や肋骨のパターン形成異常を引き起こして、先天性脊椎奇形のモデルとなります。さらにNotchシグナルは分化・増殖・組織恒常性とも交差するため、Dll3の機能喪失研究は、発生や疾患に関連する状況における経路間クロストークの解明に有用です。

Delta-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるDll3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Dll3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Dll3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Delta-3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Delta-3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Dll3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Delta-3の機能に不可欠なDll3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Dll3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Delta-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびDelta-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Dll3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Delta-3 HDRプラスミド（m）および Delta-3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDll3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDll3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。