DEF6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405524

概要

DEF6（differentially expressed in FDCP 6 homolog）は、免疫に関連するグアニンヌクレオチド交換因子（GEF）をコードしており、抗原受容体の下流で起こるシグナル伝達を統合的に制御します。すなわち、膜近傍での初期イベントを、アクチン再構築や転写応答と結び付けて調整します。リンパ球では、DEF6が小型GTPアーゼ経路を調節し、Ca²⁺依存性シグナル伝達にも関与することで、NFAT依存的な遺伝子発現や、活性化・分化を方向付けるサイトカインプログラムに影響を与えます。これらの機能を通じて、DEF6は免疫シナプスの形成・維持や、より広い適応免疫の恒常性調節に寄与します。DEF6の活性または発現の制御異常は、免疫シグナルの破綻や免疫介在性病態への感受性と関連づけられており、免疫制御の機構解明研究に有用な標的となります。

DEF6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDEF6遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DEF6内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DEF6のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DEF6タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DEF6シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DEF6欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DEF6の機能に不可欠なDEF6エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DEF6ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DEF6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDEF6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DEF6遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DEF6 HDRプラスミド（h）および DEF6 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDEF6ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDEF6標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。