Plasmide Double Nickase (h) DEC-205: sc-417220-NIC

LY75 code pour DEC-205 (CD205), un récepteur endocytaire de type lectine C, fortement exprimé par certains sous-ensembles de cellules dendritiques, qui capture des antigènes glycosylés et les achemine vers les compartiments endosomaux et lysosomaux pour leur traitement. Via une internalisation médiée par la clathrine et le trafic vésiculaire, DEC-205 favorise la présentation par le CMH de classe II et peut moduler les voies de présentation croisée qui façonnent l’amorçage de la réponse immunitaire adaptative. L’engagement de DEC-205 s’articule avec des programmes de reconnaissance des motifs (pattern recognition) et de signalisation induite par les cytokines, qui régulent la maturation des cellules dendritiques, la tolérance et la polarisation des lymphocytes T. Une prise en charge antigénique et une fonction des cellules dendritiques dérégulées impliquant LY75 sont pertinentes dans l’étude de l’auto-immunité, de l’inflammation chronique, de la biologie des infections et des microenvironnements immunitaires tumoraux.

DEC-205 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LY75 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LY75. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LY75. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LY75.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.