DDX18 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406057

概要

DDX18は核小体に局在するDEAD-box型RNAヘリカーゼをコードしており、ATP依存的なRNAリモデリングをリボソーム生合成およびRNAプロセシングと連動させる役割を担う。DDX18はpre-rRNAの成熟、前リボソーム粒子の組み立て、ならびに細胞周期の進行や全体的なタンパク質合成能力に影響する核小体ストレス応答の制御に関与する。DDX18機能の破綻はrRNAプロセシングや翻訳恒常性を乱し得ることから、この因子は増殖制御やゲノム維持プログラムとも関連づけられている。がん関連の転写解析および機能解析研究においてDDX18の発現変化や依存性が報告されており、増殖に関わるRNA代謝の機序を理解するための重要な結節点としての有用性が示唆されている。

DDX18 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDDX18遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DDX18内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DDX18のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DDX18タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DDX18シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DDX18欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DDX18の機能に不可欠なDDX18エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DDX18ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DDX18 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDDX18 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DDX18遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DDX18 HDRプラスミド（h）および DDX18 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDDX18ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDDX18標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。