DDRGK1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-413090

概要

DDRGK1（DDRGK domain containing 1；UFBP1 とも呼ばれる）は、小胞体（ER）の恒常性維持とタンパク質品質管理を支える UFM1 結合（コンジュゲーション）システムの必須構成要素です。本タンパク質は ER における UFMylation に関与し、リボソーム関連プロセスおよび ER 関連分解（ERAD）を、アンフォールディッド・プロテイン・レスポンス（UPR）を含む細胞ストレス適応へと結び付けます。これらの経路を介して、DDRGK1 はプロテオスタシス、ER ストレス下での細胞生存、ならびに分泌タンパク質の取り扱いの協調に影響を与えます。DDRGK1 を含む UFM1 経路因子の機能異常は、造血機能障害やストレス関連疾患の病態などの文脈で細胞の脆弱性と関連づけられており、機構解明研究の有用な標的となります。

DDRGK1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDDRGK1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DDRGK1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DDRGK1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DDRGK1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DDRGK1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DDRGK1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DDRGK1の機能に不可欠なDDRGK1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DDRGK1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DDRGK1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDDRGK1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DDRGK1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DDRGK1 HDRプラスミド（h）および DDRGK1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDDRGK1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDDRGK1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。