Plásmido CRISPR de Activación (h) DDR2: sc-400414-ACT

El receptor 2 del dominio discoidina (DDR2) es una tirosina quinasa receptora activada por colágeno que media la señalización célula–matriz, regulando la adhesión, la migración, la proliferación y la remodelación de la matriz extracelular. Tras unirse a colágenos fibrilares, DDR2 desencadena señalización dependiente de fosforilación a través de vías como MAPK/ERK, PI3K/AKT y las quinasas de la familia SRC, influyendo en la dinámica del citoesqueleto y en programas de transcripción vinculados a la remodelación tisular. La actividad de DDR2 está implicada en las interacciones estroma–tumor y en procesos fibróticos por su papel en la detección de colágeno y el recambio de la matriz, y la alteración de la señalización de DDR2 se ha asociado con cambios en el comportamiento invasivo y en fenotipos mesenquimales. Estas propiedades hacen de DDR2 una diana útil para estudiar la señalización impulsada por colágeno, transiciones tipo EMT y la regulación del destino celular por el microambiente.

DDR2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DDR2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DDR2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DDR2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DDR2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DDR2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DDR2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DDR2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DDR2 en células tumorales con expresión de DDR2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.