DDIT3/GADD153/CHOP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419970

概要

マウスDdit3はDDIT3（GADD153/CHOPとも呼ばれる）をコードしており、細胞ストレス下で誘導されるbZIP型転写因子である。C/EBPファミリー因子とヘテロ二量体を形成し、ストレス時の遺伝子発現を再プログラムする。DDIT3はPERK–eIF2α–ATF4シグナルの下流に位置する小胞体（ER）ストレス応答／小胞体未折りたたみタンパク質応答（UPR）の中心的エフェクターであり、ERストレスを酸化ストレス、栄養欠乏、DNA損傷経路と統合する。DDIT3はアポトーシス、オートファジー、細胞周期制御を調節し、ミトコンドリアの健全性や細胞運命を決定する転写プログラムに影響を与える。DDIT3活性の変化は炎症性および代謝性の表現型に関与することが示唆されており、神経変性、糖尿病関連のβ細胞ストレス、腫瘍微小環境におけるストレス適応のモデルで、機序的な指標（リードアウト）として広く用いられている。

DDIT3/GADD153/CHOP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるDdit3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ddit3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ddit3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DDIT3/GADD153/CHOPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DDIT3/GADD153/CHOPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ddit3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DDIT3/GADD153/CHOPの機能に不可欠なDdit3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ddit3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DDIT3/GADD153/CHOP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびDDIT3/GADD153/CHOP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ddit3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DDIT3/GADD153/CHOP HDRプラスミド（m）および DDIT3/GADD153/CHOP HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDdit3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDdit3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。