Plasmide Double Nickase (h) DDIT3/CHOP/GADD153: sc-400051-NIC

DDIT3 code le facteur de transcription CHOP (GADD153), une protéine bZIP inductible par le stress qui forme des hétérodimères avec des membres de la famille C/EBP afin de reprogrammer l’expression génique lors du stress cellulaire. CHOP est un effecteur central de la réponse aux protéines mal repliées (UPR), intégrant la signalisation PERK–eIF2α–ATF4 pour réguler l’apoptose, le contrôle rédox et la protéostasie en situation de stress du réticulum endoplasmique. Au-delà du stress du RE, DDIT3 participe à des voies de réponse intégrée au stress liées à la privation de nutriments, au stress oxydatif et à des signaux inflammatoires, influençant les décisions de destinée cellulaire et les programmes de différenciation. Une activité dérégulée de CHOP est impliquée dans des dysfonctionnements métaboliques, des modèles de neurodégénérescence, des lésions tissulaires inflammatoires et des contextes oncogéniques, notamment la fusion FUS-DDIT3 associée au liposarcome myxoïde, ce qui fait de DDIT3 un nœud clé pour les études mécanistiques des réseaux transcriptionnels d’adaptation au stress.

DDIT3/CHOP/GADD153 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DDIT3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DDIT3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DDIT3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DDIT3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.