DDIT3/CHOP/GADD153 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400051-NIC

DDIT3は転写因子CHOP（GADD153）をコードしており、CHOPはストレスによって誘導されるbZIPタンパク質で、C/EBPファミリーのメンバーとヘテロ二量体を形成し、細胞ストレス下で遺伝子発現を再プログラムします。CHOPは小胞体ストレスにおけるアンフォールデッド・プロテイン・レスポンス（UPR）の中核的エフェクターであり、PERK–eIF2α–ATF4シグナル伝達を統合して、アポトーシス、レドックス制御、プロテオスタシスを調節します。ERストレスにとどまらず、DDIT3は栄養欠乏、酸化ストレス、炎症性シグナルに関連する統合ストレス応答（ISR）経路にも関与し、細胞運命の決定や分化プログラムに影響を与えます。CHOP活性の破綻は、代謝異常、神経変性のモデル、炎症性組織障害、ならびに粘液型脂肪肉腫に関連するFUS-DDIT3融合を含む腫瘍性の状況とも関連しており、DDIT3はストレス適応的な転写ネットワークの機構研究における重要な結節点となっています。

DDIT3/CHOP/GADD153 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における DDIT3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、DDIT3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、DDIT3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、DDIT3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。