DDI1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-428086

概要

マウスDDI1（DNA damage-inducible 1 homolog）は、ユビキチン様ドメインおよびユビキチン結合ドメイン、ならびにレトロウイルスプロテアーゼ様領域を介して、ユビキチン依存的なプロテオスタシスに関与すると考えられる保存性の高いタンパク質をコードしています。DDI1はタンパク質分解回転の制御、ストレス適応、DNA損傷応答とのクロストークに関連づけられており、タンパク質品質管理と細胞恒常性の維持における役割と整合します。DDI1関連経路の撹乱は、ユビキチン化タンパク質の蓄積やストレスシグナル出力に影響し、神経変性、がん生物学、炎症応答のモデルに関連する可能性があります。マウス系では、DDI1はユビキチン介在経路がゲノム安定性およびプロテオトキシックストレスとどのように交差するかを研究するための扱いやすい結節点となります。

DDI1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるDdi1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ddi1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ddi1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DDI1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DDI1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ddi1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DDI1の機能に不可欠なDdi1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ddi1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DDI1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびDDI1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ddi1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DDI1 HDRプラスミド（m）および DDI1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDdi1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDdi1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。