DD1 Double Nickase Plasmid (h): sc-403693-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DD1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DD1 Double-Nickase-Plasmid (h) und DD1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf AKR1C1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DD1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403693-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DD1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403693-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AKR1C1 kodiert das Mitglied C1 der Aldo-Keto-Reduktase-Familie 1 (DD1), eine NADPH-abhängige Oxidoreduktase, die reaktive Aldehyde und Ketosteroide ineinander umwandelt, darunter progesteronabgeleitete Verbindungen sowie Androgen-/Östrogenvorstufen. Durch die Regulation des lokalen Steroidstoffwechsels und die Entgiftung von Produkten der Lipidperoxidation beeinflusst DD1 die Redox-Homöostase, die Verarbeitung von Xenobiotika und hormonresponsive Transkriptionsprogramme. Eine veränderte AKR1C1-Aktivität wird mit Verschiebungen in der Steroidsignalgebung und in oxidativen Stressantworten in Verbindung gebracht, die häufig in der Endokrinologie und in krebsbezogenen Signalwegen untersucht werden. Als zytosolisches Enzym an der Schnittstelle von Stoffwechsel und Signalübertragung wird AKR1C1 häufig im Hinblick auf seine Auswirkungen auf Zellproliferation, Differenzierung und Stressadaptation analysiert.
DD1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des AKR1C1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von AKR1C1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die AKR1C1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit AKR1C1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.