DcpS CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407308

概要

DCPSはヒトDcpSスカベンジャー・デキャッピング酵素をコードしており、3′→5′方向のmRNA分解過程で生じる残存キャップ構造を切断するヒスチジントライアド（HIT）型加水分解酵素である。これによりキャップ由来代謝産物のリサイクルを促し、RNAターンオーバーの恒常性維持に寄与する。m7GpppNなどのキャップ二ヌクレオチドを加水分解することで、DcpSは細胞質および核におけるRNA品質管理プロセスを補完し、mRNA分解とヌクレオチド回収の効率的な連携を支える。DCPS活性の変化はトランスクリプトームの安定性やRNA監視機構を攪乱し、遺伝子発現プログラムの制御異常に関連する表現型と結び付く可能性がある。そのためDCPSは、RNA代謝、ストレス適応的な転写応答、ならびにmRNA分解速度論を規定する機構の文脈で頻繁に研究されている。

DcpS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDCPS遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DCPS内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DCPSのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DcpSタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DcpSシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DCPS欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DcpSの機能に不可欠なDCPSエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DCPSゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DcpS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDcpS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DCPS遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DcpS HDRプラスミド（h）および DcpS HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDCPSホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDCPS標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。