Plásmido CRISPR de Activación (h) DC-SIGN: sc-401368-ACT

CD209 codifica DC-SIGN (CD209), un receptor de lectina tipo C que se expresa predominantemente en células dendríticas y en determinados subgrupos de macrófagos, donde media el reconocimiento dependiente de calcio de glicanos ricos en manosa y fucosilados. Mediante la unión a ligandos y su internalización, DC-SIGN modula la captación de antígenos, su direccionamiento endosomal y la presentación de antígenos, a la vez que coordina la comunicación entre la inmunidad innata y la adaptativa. Las señales y el tráfico intracelular aguas abajo de DC-SIGN convergen con vías que controlan la maduración de las células dendríticas, la producción de citocinas y el reconocimiento de patógenos, lo que influye en la calidad del cebado de las células T. Se ha implicado la alteración de la actividad y la expresión de DC-SIGN en la evasión inmunitaria por parte de microbios glicosilados y en contextos inflamatorios en los que los estados de activación de las células dendríticas contribuyen a una desregulación inmunitaria asociada a la enfermedad.

DC-SIGN El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CD209 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DC-SIGN El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CD209 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CD209, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DC-SIGN. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CD209 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DC-SIGN en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DC-SIGN en células tumorales con expresión de CD209 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.