DAX-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-402180-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DAX-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DAX-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und DAX-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NR0B1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: DAX-1: sc-293452
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DAX-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402180-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DAX-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402180-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NR0B1 kodiert DAX-1 (NR0B1), einen atypischen orphanen nukleären Rezeptor, der primär als transkriptioneller Koregulator und nicht als klassischer DNA-bindender Rezeptor wirkt. DAX-1 moduliert steroidogene Gennetzwerke, indem es mit nukleären Rezeptoren und Koregulatoren interagiert, um Signalwege zu steuern, die die Entwicklung von Nebenniere und Gonaden, die Biosynthese von Steroidhormonen sowie die Signalübertragung entlang der Hypothalamus–Hypophysen–Gonaden-Achse kontrollieren. In humanen Zellen beeinflusst NR0B1 die Lineage-Festlegung und die endokrine Homöostase über Programme der transkriptionellen Repression/Aktivierung, die SF-1/NR5A1- und LRH-1/NR5A2-assoziierte regulatorische Schaltkreise betreffen. Eine Fehlregulation von NR0B1 ist mit Störungen der Geschlechtsentwicklung und Phänotypen einer Nebenniereninsuffizienz verknüpft, was seinen Nutzen als Zielstruktur für mechanistische Studien zur endokrinen Entwicklung und zur Signalgebung nukleärer Rezeptoren unterstreicht.
DAX-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NR0B1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NR0B1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NR0B1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NR0B1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.