DAX-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419053

Visão geral

Nr0b1 codifica o DAX-1 (NR0B1), um receptor nuclear órfão atípico que atua principalmente como correagulador transcricional em tecidos esteroidogénicos e reprodutivos. O DAX-1 modula redes de sinalização de receptores nucleares ao reprimir ou ajustar finamente programas de transcrição controlados por fatores como o SF-1/NR5A1, influenciando assim a biossíntese de hormonas esteroides, o desenvolvimento adrenal e a regulação do eixo hipotálamo–hipófise–gonadal. Em modelos murinos, alterações na atividade do DAX-1 afetam a diferenciação gonadal, a gametogénese e a homeostase endócrina, tornando o Nr0b1 um nó relevante para o estudo da regulação génica do desenvolvimento e do controlo de vias esteroidogénicas. A desregulação de ortólogos de NR0B1 tem sido associada a fenótipos congénitos adrenais e reprodutivos, apoiando o seu uso em estudos mecanísticos do desenvolvimento endócrino e de vias de determinação sexual.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO DAX-1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Nr0b1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Nr0b1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Nr0b1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína DAX-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Nr0b1 para a investigação da sinalização de DAX-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Nr0b1 críticos para a função DAX-1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Nr0b1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo DAX-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo DAX-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Nr0b1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo DAX-1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR DAX-1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Nr0b1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Nr0b1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.