DARPP-32 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422380

概要

Ppp1r1bは、線条体の中型有棘ニューロンにおいてドーパミン作動性シグナルとグルタミン酸作動性シグナルを統合する中核因子であるDARPP-32（dopamine- and cAMP-regulated phosphoprotein, 32 kDa）をコードしています。DARPP-32はリン酸化状態に応じたスイッチングにより、プロテインホスファターゼ1（PP1）の活性を調節し、cAMP/PKAシグナル伝達を介してシナプス可塑性、イオンチャネル機能、神経伝達物質受容体シグナルの下流制御へと結び付けます。このノードは報酬学習、運動制御、ニューロモジュレーターに対する転写応答を担う経路と交差しており、Ppp1r1bは大脳基底核回路の研究で共通の指標として用いられています。DARPP-32シグナルの変調は、ドーパミンシグナルの破綻、不適応的な可塑性、ならびにマウスモデルにおけるストレス関連行動表現型などを含む、神経精神疾患および神経変性疾患の病態機構との関連が報告されています。

DARPP-32 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPpp1r1b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ppp1r1b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ppp1r1bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DARPP-32タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DARPP-32シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ppp1r1b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DARPP-32の機能に不可欠なPpp1r1bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ppp1r1bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DARPP-32 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびDARPP-32 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ppp1r1b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DARPP-32 HDRプラスミド（m）および DARPP-32 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPpp1r1bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPpp1r1b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。