Plasmide Double Nickase (h) DAPK: sc-402702-NIC

La kinase 1 associée à la mort cellulaire (DAPK1) code DAPK, une kinase sérine/thréonine régulée par le Ca2+/calmoduline, qui intègre les signaux apoptotiques et autophagiques à la dynamique du cytosquelette. DAPK module les voies de mort cellulaire par la phosphorylation de multiples substrats, influençant les réponses au stress, l’anoïkis et l’apoptose dépendante des mitochondries, et s’articule avec les réseaux de signalisation MAPK et inflammatoires. Une activité ou une expression altérée de DAPK1 a été associée à une dérégulation des programmes de survie et de migration cellulaires, la reliant à des processus pertinents pour les maladies tels que la suppression tumorale, la signalisation du stress liée à la neurodégénérescence et les lésions tissulaires médiées par le système immunitaire. En tant que régulateur nodal de la mort cellulaire programmée, DAPK1 est fréquemment étudiée afin d’analyser les interactions entre voies de signalisation qui façonnent les décisions de destinée cellulaire sous stress génotoxique, oxydatif ou induit par des cytokines.

DAPK Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DAPK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DAPK1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DAPK1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DAPK1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.