Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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DAP12 Double Nickase Plasmid (h): sc-400916-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DAP12 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DAP12 Double-Nickase-Plasmid (h) und DAP12 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TYROBP abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: DAP12: sc-133174
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DAP12 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400916-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DAP12 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400916-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane TYROBP-Gen kodiert DAP12 (auch als TYROBP bezeichnet), einen transmembranären Adapter, der die Signale von Immunrezeptoren über sein ITAM-Motiv an eine intrazelluläre Aktivierung koppelt. DAP12 assoziiert mit Rezeptoren wie TREM2, SIRPβ1 und verschiedenen aktivierenden KIRs und treibt SYK-abhängige Signalwege an, die Phagozytose, Zytokinproduktion, Zytoskelett-Remodelling und die Reifung angeborener Immunzellen regulieren. Es wird stark in Zellen der myeloischen Linie exprimiert, darunter Makrophagen, Mikroglia, dendritische Zellen und Osteoklasten, und verbindet extrazelluläre Signale mit entzündlichen und homöostatischen Programmen. Genetische Störungen der TYROBP-DAP12-Signalgebung wurden mit neuroinflammatorischen Mechanismen und der Osteoimmunologie in Verbindung gebracht, mit Relevanz für Erkrankungen wie die Nasu-Hakola-Krankheit und allgemeinere Kontexte mikroglialer Dysfunktion.
DAP12 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TYROBP-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TYROBP abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TYROBP-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TYROBP-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.