DABP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405222

概要

ヒトのDBPは、ビタミンD結合タンパク質（DABP、group-specific componentとしても知られる）をコードしている。DABPは血漿中に高濃度に存在する糖タンパク質で、ビタミンD代謝産物を運搬し、それらの生物学的利用能の調節にも寄与する。運搬体としての機能に加え、DABPは組織損傷時のアクチン除去（スカベンジ）に関与し、マクロファージ活性化に関連する作用を介して自然免疫プロセスとも連関する。DBPの変動は、ビタミンD恒常性の変化や炎症性表現型と関連する文脈で検討されており、内分泌—免疫クロストーク研究における解析対象としての有用性が示されている。したがって、DBPの発現およびDABPによるリガンド結合は、ビタミンD代謝を制御する経路、バリア機能や組織損傷応答、ならびに全身性の炎症シグナル伝達に関わる経路において重要である。

DABP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDBP遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DBP内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DBPのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DABPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DABPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DBP欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DABPの機能に不可欠なDBPエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DBPゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DABP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDABP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DBP遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DABP HDRプラスミド（h）および DABP HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDBPホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDBP標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。