Plasmide CRISPR d'Activation (h) Dab1: sc-402167-ACT

DAB1 code pour Disabled-1 (Dab1), une protéine adaptatrice cytoplasmique qui transmet les signaux de Reelin afin de coordonner la migration neuronale, la lamination corticale et la croissance des neurites au cours du développement cérébral. Lors de l’interaction de Reelin avec les récepteurs VLDLR et LRP8 (ApoER2), Dab1 est phosphorylée sur des tyrosines et se couple en aval aux kinases de la famille Src ainsi qu’à des voies de remodelage du cytosquelette qui déterminent le positionnement cellulaire et l’organisation synaptique. Cet axe de signalisation recoupe la dynamique de l’actine, la régulation des microtubules et les mécanismes de renouvellement des protéines, qui influencent la polarité et la connectivité neuronales. Une activité dérégulée de la voie DAB1/Reelin est impliquée dans la biologie de maladies neurodéveloppementales et neuropsychiatriques, ce qui fait de DAB1 un nœud pertinent pour des études mécanistiques sur la formation des circuits cérébraux et les phénotypes de migration cellulaire.

Dab1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DAB1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Dab1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DAB1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DAB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Dab1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DAB1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Dab1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Dab1 dans les cellules tumorales présentant une expression de DAB1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.