Plasmide Double Nickase (h) DAAO: sc-402772-NIC

Le gène humain **DAO** code la **D‑amino‑acide oxydase (DAAO)**, une flavoprotéine peroxysomale qui catalyse la désamination oxydative des D‑acides aminés neutres en leurs acides cétoniques correspondants, tout en générant du peroxyde d’hydrogène. Cette activité s’inscrit à l’interface du catabolisme des acides aminés, de l’homéostasie rédox et du métabolisme des espèces réactives de l’oxygène associées aux peroxysomes, avec une importance particulière pour la régulation de la disponibilité de la D‑sérine et son rôle de co‑agoniste des récepteurs NMDA dans le système nerveux central. Les altérations de la fonction de DAO/DAAO ont été étudiées dans le cadre de la biologie des maladies neuropsychiatriques et neurodégénératives, où des modifications du renouvellement de la D‑sérine et des voies du stress oxydant peuvent influencer la signalisation synaptique. DAO est également utilisée comme nœud métabolique pour étudier le trafic des enzymes peroxysomales, la chimie d’oxydation dépendante de la flavine et les réponses cellulaires au peroxyde.

DAAO Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DAO dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DAO. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DAO. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DAO.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.