D53 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423478

概要

Tpd52l1は、腫瘍タンパク質D52様ファミリーに属する細胞質タンパク質D53をコードしており、膜輸送、小胞動態、細胞骨格の構築の制御に関与すると関連付けられています。マウス細胞では、D53は分泌、細胞極性、増殖を協調させる過程に関与し、上皮細胞および間質細胞の挙動を形作るシグナル伝達プログラムと連動することが報告されています。D52ファミリー分子の発現変化は、がん遺伝子による形質転換や増殖制御異常の状況で観察されており、そのためTpd52l1は、細胞周期進行、遊走、ストレス適応的なリモデリングの機構を解析するうえで有用な標的となります。Tpd52l1の遺伝学的攪乱は、輸送機構、増殖因子（マイトジェン）シグナル、ならびに腫瘍生物学や組織恒常性に関連する表現型の間の経路的つながりを検討する研究を支援します。

D53 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTpd52l1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tpd52l1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tpd52l1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、D53タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、D53シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tpd52l1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• D53の機能に不可欠なTpd52l1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tpd52l1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• D53 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびD53 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tpd52l1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  D53 HDRプラスミド（m）および D53 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTpd52l1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTpd52l1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。