Plasmide Double Nickase (h) Cytokeratin 5: sc-400671-NIC

KRT5 code la cytokératine 5, une protéine de filament intermédiaire de type II qui forme un hétérodimère avec la kératine 14 afin de constituer le réseau de kératines basales dans les épithéliums stratifiés. Cette armature cytosquelettique assure la résistance mécanique, la polarité cellulaire et des structures d’ancrage telles que les hémidesmosomes, tout en s’intégrant aux programmes qui régulent la différenciation épithéliale et le maintien de la barrière. L’expression de KRT5 est largement utilisée comme marqueur des kératinocytes basaux et d’états épithéliaux de type progéniteur, et des altérations de la biologie de KRT5 sont impliquées dans des phénotypes de fragilité épithéliale et une différenciation dérégulée dans la peau et les voies aériennes. Par conséquent, KRT5 est fréquemment étudié dans des modèles d’homéostasie épidermique, de réponse aux lésions et de remodelage épithélial liés au stress et à la dégénérescence épithéliale associés aux maladies.

Cytokeratin 5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KRT5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KRT5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KRT5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KRT5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.