Plasmide Double Nickase (h) Cytokeratin 3: sc-402161-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Cytokeratin 3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Cytokeratin 3 Double Nickase (h) et le plasmide Cytokeratin 3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant KRT3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Cytokeratin 3 | sc-402161-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Cytokeratin 3 | sc-402161-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KRT3 code la cytokératine 3, une protéine de filament intermédiaire de type II qui forme des hétéropolymères obligatoires avec la kératine 12 pour construire le réseau cytosquelettique des cellules épithéliales cornéennes. Ce système filamentaire confère une résistance mécanique, maintient l’architecture épithéliale et contribue à des processus tels que la différenciation cellulaire, la migration et la réparation des plaies grâce à une régulation coordonnée du cytosquelette et des jonctions cellulaires. Une expression altérée ou une perturbation structurale des kératines enrichies dans la cornée est associée à des phénotypes de fragilité épithéliale et à des pathologies de la surface cornéenne, faisant de KRT3 un marqueur utile et un nœud fonctionnel pour l’étude de l’homéostasie de l’épithélium oculaire. Par ailleurs, le remodelage du réseau de kératine interfère avec les réponses au stress et les voies de signalisation associées au cytosquelette, qui influencent l’intégrité de la barrière et la régénération tissulaire.
Cytokeratin 3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KRT3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KRT3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KRT3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KRT3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.