Plasmide Double Nickase (m) Cytokeratin 19: sc-421344-NIC

Le gène murin Krt19 code la cytokératine 19 (K19), un filament intermédiaire de type I qui forme des hétéropolymères obligatoires avec les kératines de type II afin de soutenir l’architecture du cytosquelette épithélial et sa résistance mécanique. K19 contribue au contrôle de la forme cellulaire, à la dynamique de l’adhérence et aux programmes de différenciation épithéliale, et son réseau filamentaire s’interface avec des nœuds de signalisation qui régulent les réponses au stress, la polarité et le remodelage du cytosquelette. En tant que marqueur enrichi dans les épithéliums simples et dans certains états épithéliaux à caractère progéniteur, K19 est fréquemment utilisée pour stratifier les sous-types épithéliaux et pour suivre des transitions telles que le remodelage et l’engagement de lignée. Une expression dérégulée de K19 et une organisation anormale de ses filaments sont associées à une altération de l’intégrité épithéliale et sont largement étudiées dans des modèles murins de lésion tissulaire, d’inflammation et de transformation oncogénique.

Cytokeratin 19 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Krt19 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Krt19. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Krt19. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Krt19.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.