Plasmide Double Nickase (h) Cytokeratin 19: sc-400281-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Cytokeratin 19 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Cytokeratin 19 Double Nickase (h) et le plasmide Cytokeratin 19 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant KRT19. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Cytokeratin 19 Antibody (A-3): sc-376126
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Cytokeratin 19 | sc-400281-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Cytokeratin 19 | sc-400281-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KRT19 code la cytokératine 19, une protéine de filament intermédiaire de type I qui contribue à l’organisation du cytosquelette épithélial, à la stabilité mécanique cellulaire et au maintien de la polarité. La cytokératine 19 participe à l’assemblage et au remodelage des filaments de kératine, en coordination avec l’adhérence cellulaire et les complexes jonctionnels, influençant la différenciation épithéliale et les réponses au stress. Une expression altérée de KRT19 est fréquemment utilisée comme indicateur moléculaire de la lignée épithéliale et des changements d’état cellulaire observés lors de la dysplasie, des transitions phénotypiques associées à l’invasion et de la dissémination métastatique. En recherche sur les maladies humaines, KRT19 est couramment étudié dans le contexte de l’hétérogénéité tumorale, de la régulation des marqueurs épithéliaux et des programmes de signalisation liés à la migration et à la survie.
Cytokeratin 19 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KRT19 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KRT19. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KRT19. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KRT19.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.