Plasmide Double Nickase (h) Cytokeratin 18: sc-400305-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Cytokeratin 18 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Cytokeratin 18 Double Nickase (h) et le plasmide Cytokeratin 18 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant KRT18. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Cytokeratin 18 Antibody (RGE53): sc-32329
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Cytokeratin 18 | sc-400305-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Cytokeratin 18 | sc-400305-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KRT18 code la cytokératine 18, une protéine de filament intermédiaire de type I qui s’hétéropolymérise avec la kératine 8 pour former le cœur du réseau cytosquelettique des cellules épithéliales simples. La cytokératine 18 contribue à la stabilité mécanique cellulaire, au positionnement des organites et à la polarité épithéliale, et elle est remodelée de façon dynamique pendant la mitose et lors des réponses au stress via une réorganisation des filaments dépendante de la phosphorylation. Elle participe aux modifications du cytosquelette associées à l’apoptose, notamment par un clivage médié par les caspases pouvant influencer l’intégrité et la signalisation des cellules épithéliales. Des altérations de l’expression de KRT18, de l’organisation des filaments ou des profils de clivage ont été associées à des lésions épithéliales et à divers états pathologiques, ce qui en fait un marqueur fréquent et un nœud mécanistique dans les études de l’homéostasie épithéliale et du stress.
Cytokeratin 18 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KRT18 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KRT18. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KRT18. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KRT18.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.