Plasmide Double Nickase (h) Cytokeratin 13: sc-401320-NIC

KRT13 code la cytokératine 13, une protéine de filament intermédiaire de type I qui s’associe à des kératines partenaires pour former le réseau cytosquelettique caractéristique des épithéliums stratifiés non cornifiés. La cytokératine 13 contribue à l’intégrité structurelle de l’épithélium, à l’adhésion cellule–cellule et à la résistance au stress en organisant l’assemblage des filaments et en coordonnant son action avec les complexes desmosomaux et hémidesmosomaux. Son expression est régulée au cours de la différenciation et des programmes de remodelage épithélial, qui recoupent la réponse aux lésions et le maintien de la fonction barrière. Les altérations des profils d’expression de KRT13 sont étudiées dans la dysplasie épithéliale et les changements de différenciation associés aux carcinomes, ce qui en fait un marqueur utile pour explorer l’état de kératinisation et la plasticité des lignages épithéliaux.

Cytokeratin 13 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KRT13 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KRT13. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KRT13. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KRT13.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.