Plásmido Doble Nickase (h) Cytokeratin 10: sc-400193-NIC

KRT10 codifica la citoqueratina 10, una proteína de filamento intermedio de tipo I que se asocia con la queratina 1 para formar la red de queratinas suprabasales en epitelios estratificados. Este sistema de filamentos aporta resistencia mecánica, sostiene la adhesión célula–célula asociada a desmosomas y contribuye a la diferenciación terminal y a la formación de la barrera epidérmica. La expresión de KRT10 está estrechamente vinculada a los programas de maduración de los queratinocitos y a la interacción con vías de diferenciación dependientes de calcio y de respuesta al estrés que remodelan el citoesqueleto. La alteración genética o la expresión desregulada de KRT10 se asocia con trastornos hereditarios de la cornificación, incluida la ictiosis epidermolítica, y se utiliza con frecuencia como marcador de diferenciación epitelial alterada en modelos de enfermedad dermatológica.

Cytokeratin 10 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KRT10 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KRT10. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KRT10. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KRT10 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.