Cytokeratin 10 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400193-ACT

KRT10 はサイトケラチン10をコードしており、これは I 型中間径フィラメントタンパク質の一種で、ケラチン1と対になって、分化過程にある表皮ケラチノサイトの傍基底層（suprabasal）におけるケラチンネットワークを形成します。この細胞骨格の足場は機械的強度を支えるとともに、デスモソームを介した細胞接着と連結し、層状化や角化被膜（cornified envelope）形成を含む終末分化プログラムを協調的に制御します。KRT10 の発現はケラチノサイトの成熟および組織特異的な転写制御と密接に連動しており、ケラチンフィラメントの恒常性が乱れると上皮の完全性やストレスシグナル伝達が変化し得ます。KRT10 に関わる遺伝学的変化や発現変動は、表皮分化異常や過角化を特徴とする疾患に関与しており、皮膚バリア生物学や上皮疾患メカニズムの研究に有用な軸となります。

Cytokeratin 10 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KRT10の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Cytokeratin 10 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KRT10 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKRT10転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Cytokeratin 10の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKRT10遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCytokeratin 10依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKRT10発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCytokeratin 10経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。