Plasmide Double Nickase (h) Cytokeratin 1: sc-400893-NIC

KRT1 code la cytokératine 1, une protéine de filament intermédiaire de type II qui forme un hétérodimère avec la kératine 10 afin de constituer le réseau de kératines suprabasales dans les épithéliums stratifiés. Cette charpente cytosquelettique confère une résistance mécanique, soutient l’adhésion cellule–cellule et coordonne la différenciation des kératinocytes grâce au remodelage dynamique des filaments intermédiaires. La fonction de la cytokératine 1 s’articule avec les programmes épithéliaux de réponse au stress ainsi qu’avec le renouvellement des filaments dépendant de la phosphorylation des kératines, qui influencent la formation de la barrière et l’intégrité tissulaire. Une expression altérée de KRT1 ou des mutations sont associées à des troubles héréditaires de la kératinisation et contribuent à des phénotypes de fragilité épithéliale, ce qui en fait un marqueur utile et un nœud fonctionnel en biologie cutanée et dans la modélisation des maladies.

Cytokeratin 1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KRT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KRT1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KRT1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KRT1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.