Plasmide Double Nickase (h) cystatin A: sc-416374-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) cystatin A correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide cystatin A Double Nickase (h) et le plasmide cystatin A Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CSTA. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: cystatin A Antibody (B-11): sc-376759
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) cystatin A | sc-416374-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) cystatin A | sc-416374-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CSTA code la cystatine A, un inhibiteur de protéases à cystéine de type I qui freine l’activité des cathepsines dans le cytosol et à la périphérie cellulaire, contribuant à préserver l’intégrité de la barrière épithéliale et un renouvellement protéique contrôlé. En modulant la protéolyse lysosomale et extralysosomale, la cystatine A influence des processus tels que la différenciation des kératinocytes, la desquamation et la protection contre le stress médié par les protéases. Une expression dérégulée de CSTA ou un déséquilibre avec les cathepsines cibles a été associé à une altération de l’homéostasie tissulaire et à des microenvironnements inflammatoires, avec des liens rapportés notamment dans les cancers des épithéliums malpighiens et certaines affections cutanées. En tant que cystatine humaine, elle sert aussi à étudier les réseaux protéase–antiprotéase qui influencent l’invasion, le traitement des antigènes et les voies de mort cellulaire.
cystatin A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CSTA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CSTA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CSTA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CSTA.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.