Plasmide CRISPR d'Activation (h) CysLT₂ Receptor: sc-403435-ACT

Le gène humain **CYSLTR2** code le récepteur 2 des leucotriènes cystéinylés (récepteur CysLT2), un récepteur couplé aux protéines G qui se lie à **LTC4**, **LTD4** et **LTE4** afin de réguler la signalisation inflammatoire. L’activation du récepteur peut se coupler à **Gq/PLCβ** pour augmenter le **Ca2+** intracellulaire, activer les voies **MAPK**, et moduler la perméabilité endothéliale, le tonus du muscle lisse ainsi que le recrutement des leucocytes. L’activité de **CYSLTR2** s’intègre à la biologie de l’acide arachidonique et des eicosanoïdes, influençant la production de cytokines et le remodelage tissulaire dans des contextes immunitaires et vasculaires. Une signalisation dérégulée des récepteurs aux leucotriènes et des variants récurrents de **CYSLTR2** ont été associés à des mécanismes de maladies inflammatoires et à des programmes de signalisation oncogénique dans certaines tumeurs, ce qui soutient son intérêt comme nœud de voie pour des études mécanistiques.

CysLT2 Receptor Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CYSLTR2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CysLT2 Receptor Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CYSLTR2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CYSLTR2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CysLT2 Receptor. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CYSLTR2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CysLT2 Receptor au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CysLT2 Receptor dans les cellules tumorales présentant une expression de CYSLTR2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.