CYP3A4 CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-416463-ACT-2

ヒトCYP3A4は主に小胞体に局在する主要なシトクロムP450モノオキシゲナーゼをコードし、ステロイドや胆汁酸中間体を含む多様な外因性化合物および内因性基質の酸化的代謝を触媒する。その発現と活性はPXR（NR1I2）やCAR（NR1I3）などの核内受容体シグナル伝達経路によって制御されており、CYP3A4は肝臓における解毒プログラム、レドックス恒常性、ならびに薬物相互作用の機序と結び付いている。遺伝子多型や誘導性転写に起因する個体間差は代謝能の変動に寄与し、薬理ゲノミクス研究では有害薬物反応への感受性や肝関連形質との関連が報告されている。CYP3A4の遺伝子編集は、酵素機能や制御要素、代謝ネットワーク応答を検証するための同一遺伝的背景（アイソジェニック）の細胞モデル構築を可能にし、ヒトに関連性の高い系において外因性化合物のクリアランスやステロイド代謝への影響を定量化するのに有用である。

CYP3A4 CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CYP3A4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CYP3A4 CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における CYP3A4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCYP3A4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CYP3A4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCYP3A4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCYP3A4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCYP3A4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCYP3A4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。