CYP2W1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404238-ACT

Humanes CYP2W1 kodiert eine Cytochrom‑P450‑Monooxygenase, die den oxidativen Metabolismus verschiedenster endogener Substrate und Xenobiotika katalysiert und so zur zellulären Redoxhomöostase sowie zu Bioaktivierungs‑ und Detoxifikationsreaktionen beiträgt. Als ER‑assoziiertes Häm‑Enzym ist CYP2W1 an Phase‑I‑Stoffwechselprozessen beteiligt, die sich mit Lipidoxidation, dem Umgang mit reaktiven Sauerstoffspezies und nachgeschalteten Konjugationswegen überschneiden. In den meisten adulten Geweben ist die Expression typischerweise niedrig, soll jedoch in bestimmten Tumorkontexten erhöht sein, was CYP2W1 für die Untersuchung krebsassoziierter metabolischer Reprogrammierung und atypischer P450‑Expressionsprogramme relevant macht. Aktivität und Regulation von CYP2W1 eignen sich daher zur Analyse von Signalwegen der Xenobiotikaantwort, metabolischen Verwundbarkeiten und Gen‑Umwelt‑Interaktionen in humanen Zellmodellen.

CYP2W1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CYP2W1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CYP2W1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CYP2W1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CYP2W1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CYP2W1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CYP2W1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CYP2W1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CYP2W1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CYP2W1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.