CYP2E1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401357-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CYP2E1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CYP2E1 Double-Nickase-Plasmid (h) und CYP2E1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CYP2E1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CYP2E1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401357-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CYP2E1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401357-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Cytochrom P450 2E1 (CYP2E1) ist eine mikrosomale Monooxygenase, die kleine organische Substrate oxidiert und zum Xenobiotika-Stoffwechsel der Phase I im endoplasmatischen Retikulum beiträgt. Es ist am Redox-Cycling beteiligt und kann reaktive Sauerstoffspezies erzeugen, wodurch die CYP2E1-Aktivität mit oxidativem Stress, Lipidperoxidation und nachgeschalteter inflammatorischer Signalübertragung verknüpft ist. CYP2E1 ist in hepatische Entgiftungswege eingebunden und beeinflusst über den Metabolismus mehrerer niedermolekularer Verbindungen zelluläre Reaktionen auf Alkohol- und Chemikalienexpositionen. Eine veränderte CYP2E1-Expression oder -Aktivität wurde mit einer erhöhten Anfälligkeit für toxikantinduzierte Leberschädigungen und Phänotypen metabolischen Stresses in Verbindung gebracht, was CYP2E1 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien der Xenobiotika-Verarbeitung macht.
CYP2E1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CYP2E1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CYP2E1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CYP2E1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CYP2E1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.