CYP24 Double Nickase Plasmid (h): sc-401233-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CYP24 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CYP24 Double-Nickase-Plasmid (h) und CYP24 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CYP24A1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CYP24: sc-365700
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CYP24 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401233-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CYP24 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401233-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CYP24A1 kodiert das mitochondriale Cytochrom‑P450‑Enzym CYP24A1 (CYP24), einen zentralen Regulator des Vitamin‑D‑Stoffwechsels, der die 24‑Hydroxylierung und die anschließende Inaktivierung von 1,25‑Dihydroxyvitamin D3 und 25‑Hydroxyvitamin D3 katalysiert. Durch die Kontrolle des Calcitriol‑Umsatzes moduliert CYP24A1 VDR‑abhängige Transkriptionsprogramme, die die Calcium‑ und Phosphathomöostase, die epitheliale Differenzierung und die Immun-Signalübertragung beeinflussen. Eine veränderte CYP24A1‑Aktivität wurde mit einer dysregulierten Vitamin‑D‑Signalgebung und Störungen des Mineralstoffwechsels in Verbindung gebracht, und seine Expression wird häufig in Kontexten untersucht, in denen das Gleichgewicht der VDR‑Signalwege gestört ist, darunter Krebsbiologie und entzündliche Zustände. Als mitochondriales P450 ist CYP24A1 zudem über seine Abhängigkeit von Elektronentransferpartnern mit zellulären Redoxprozessen und metabolischer Anpassung verknüpft.
CYP24 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CYP24A1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CYP24A1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CYP24A1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CYP24A1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.