Plasmide Double Nickase (h) CYP24: sc-401233-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CYP24 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CYP24 Double Nickase (h) et le plasmide CYP24 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CYP24A1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CYP24 Antibody (E-7): sc-365700
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CYP24 | sc-401233-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CYP24 | sc-401233-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CYP24A1 code pour l’enzyme mitochondriale du cytochrome P450 CYP24A1 (CYP24), un régulateur clé du métabolisme de la vitamine D, qui catalyse la 24‑hydroxylation et l’inactivation subséquente de la 1,25‑dihydroxyvitamine D3 et de la 25‑hydroxyvitamine D3. En contrôlant le renouvellement du calcitriol, CYP24A1 module des programmes transcriptionnels dépendants du VDR qui influencent l’homéostasie du calcium et du phosphate, la différenciation épithéliale et la signalisation immunitaire. Une activité altérée de CYP24A1 a été associée à une dérégulation de la signalisation de la vitamine D et à des perturbations du métabolisme minéral, et son expression est fréquemment évaluée dans des contextes où l’équilibre de la voie du VDR est perturbé, notamment en biologie du cancer et dans les états inflammatoires. En tant que P450 mitochondriale, CYP24A1 est également impliquée dans les processus cellulaires d’oxydo‑réduction et l’adaptation métabolique du fait de sa dépendance à des partenaires de transfert d’électrons.
CYP24 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CYP24A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CYP24A1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CYP24A1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CYP24A1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.