CYP1B1 Double Nickase Plasmid (m): sc-419899-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CYP1B1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CYP1B1 Double-Nickase-Plasmid (m) und CYP1B1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Cyp1b1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CYP1B1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-419899-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CYP1B1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-419899-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen **Cyp1b1** kodiert das Cytochrom-P450-Enzym **CYP1B1**, eine häm-thiolatabhängige Monooxygenase, die den oxidativen Stoffwechsel endogener Substrate und Xenobiotika katalysiert, einschließlich Hydroxylierungsreaktionen, die für die Homöostase von Steroiden und Retinoiden relevant sind. Die Aktivität von CYP1B1 ist mit AHR-gesteuerten Transkriptionsprogrammen und Phase-I-Stoffwechselwegen verknüpft, die zelluläre Antworten auf Umweltliganden und oxidativen Stress prägen. Über seinen Einfluss auf das Redoxgleichgewicht und die Bildung bioaktiver Metaboliten wurde **Cyp1b1** im Kontext der Gefäßbiologie, der okulären Entwicklung und der gewebespezifischen Anfälligkeit für toxikantinduzierte Schädigungen untersucht. In Mausmodellen kann eine veränderte **Cyp1b1**-Funktion Signalnetzwerke nachgeschaltet zu Stoffwechselzwischenprodukten beeinflussen und damit mechanistische Forschung zu Wechselwirkungen zwischen Stoffwechsel und Entzündung sowie zu entwicklungsassoziierten Phänotypen unterstützen.
CYP1B1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Cyp1b1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Cyp1b1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Cyp1b1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Cyp1b1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.