CYP11B2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419894

概要

Cyp11b2 は、デオキシコルチコステロンからアルドステロンが生合成される最終段階を触媒するミトコンドリア局在のシトクロム P450 酵素 CYP11B2（アルドステロン合成酵素）をコードしています。この活性はステロイド産生経路の一部であり、アドレノドキシン／アドレノドキシン還元酵素からの電子伝達を酸化反応に結び付けることで、ミネラルコルチコイド産生量を調節し、その下流にある電解質および体液恒常性の維持に関与します。マウス副腎の球状帯細胞では、CYP11B2 はカルシウム依存性やアンジオテンシン II 応答性のプログラムを含むホルモンシグナルの入力を統合し、ステロイド産生量を微調整します。Cyp11b2 発現の異常やアルドステロン過剰は、心血管系および腎臓の生理における不適応と関連しており、本遺伝子は内分泌制御の機構解明やストレス応答性の代謝リモデリングの研究において重要です。

CYP11B2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCyp11b2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Cyp11b2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Cyp11b2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CYP11B2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CYP11B2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Cyp11b2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CYP11B2の機能に不可欠なCyp11b2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Cyp11b2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CYP11B2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCYP11B2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Cyp11b2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CYP11B2 HDRプラスミド（m）および CYP11B2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCyp11b2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCyp11b2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。